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產(chǎn)品展示
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口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he

  • 型   號:40310
  • 價(jià)   格:
  • 更新時(shí)間:2025-04-22
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng),特別適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜(特別配備了Acryl Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸),再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除
口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he

yan拭子基因組DNA快速提取試劑盒(離心柱型)


口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he

目錄號:40310

目錄編號

包裝單位

40310-50

50次

適用范圍:

適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。

試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性: 

v 試劑盒組成

保存

50次

裂解液ML

室溫

20 ml

結(jié)合液CB

室溫

20 ml

抑制物去除液IR

室溫

25 ml

漂洗液WB

室溫

15ml

第一次使用前按說明加指ding量乙醇

Acryl Carrier

-20℃

200μl

洗脫緩沖液EB

室溫

15 ml

蛋白酶K fen(可選)

20mg/ml

-20℃

20 mg

吸附柱AC和收集管

室溫

50套

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果

儲(chǔ)存事項(xiàng):

1. 結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 為避免降低活性,方便運(yùn)輸,提供蛋白酶K為凍干粉狀,收到后,可短暫離心后,加入1毫升滅菌水溶解。因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量分裝凍存,-20℃保存。

3. 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH值變化,各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng),特別適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜(特別配備了Acryl Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸),再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的DNA無雜質(zhì)和PCR抑制劑,可直接適用于PCR分析。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1. 不需要使用有毒的苯fen等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。

2. 節(jié)省時(shí)間,簡捷,單個(gè)樣品操作一般可在20分鐘內(nèi)完成。

3. 配備了Acryl Carrier 用于充分收集特別微量DNA。 

4. 多次柱漂洗確保高純度,提取的DNA 純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,可適用于各種常規(guī)操作,包括PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。

注意事項(xiàng):

1. 所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī),如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。

2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到特定溫度備用。

3. 結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作時(shí)戴乳膠手套,避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4. Acryl Carrier:

1) Acryl Carrier 使用方法:如果起始處理量很少(口腔yan拭子上收集到的細(xì)胞很少),我們推薦使用Acryl Carrier,如果預(yù)期有較大量DNA產(chǎn)量,用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入Acryl Carrier。使用時(shí)在每個(gè)樣品提取所需400μl結(jié)合液CB 中加入4μl Acryl Carrier,將結(jié)合液CB 與Acryl Carrier溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液CB容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量,在總共需要的結(jié)合液CB中加入總共需要的Acryl Carrier混勻備用?;旌弦涸谑覝?4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

操作步驟:(實(shí)驗(yàn)前請先閱讀注意事項(xiàng))

提示:第一次使用前請先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水乙醇,充分混勻,加入后請及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!

取樣:取一根醫(yī)用消毒棉簽(手不要碰觸脫脂棉部位),伸進(jìn)口腔,緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回刮拭20次(不時(shí)旋轉(zhuǎn)棉棒),需充分接觸口腔粘膜。

注意事項(xiàng):避免用手觸及棉簽,采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染,取樣前30分鐘內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。 

1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下,放入2ml 離心管中,加入400μl裂解液ML。

2. 再加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液,立刻渦旋振蕩充分混勻,56℃放置1小時(shí),期間每10分鐘渦旋混勻10秒。

3. 加入400μl結(jié)合液CB,立刻渦旋振蕩充分混勻,70℃放置10分鐘。

如果拭子上細(xì)胞數(shù)量少,導(dǎo)致提取的基因組DNA產(chǎn)量過低, 可以在400μl結(jié)合液CB 中加入4μl Acryl Carrier 。

4. 冷卻后加200μl 無水乙醇,立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴,收集所有的液體到管底。

如果周圍環(huán)境高于25℃,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入。

5. 將上一步混合物加入一個(gè)吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm離心30-60秒,倒掉收集管中的廢液。

棉簽的棉花可能還吸附一些液體,如果要提高產(chǎn)量,可以用干凈鑷子夾擠出液體后棄棉花,減少棉花上液體殘留。

6. 加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm 離心30秒,棄廢液。

7. 加入500μl漂洗液WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm 離心30秒,棄掉廢液。

8. 加入500μl漂洗液WB,12,000rpm 離心30秒,棄掉廢液。

9. 將吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

10. 取出吸附柱AC,放入一個(gè)干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位加20-50μl洗脫緩沖液EB(洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好),室溫放置1分鐘,12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,室溫放置1分鐘,12,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要DNA濃度較高,可以適當(dāng)減少洗脫體積,但是最小體積不應(yīng)少于20μl,體積過小降低DNA洗脫效率,減少DNA產(chǎn)量。

11. DNA可以存放在2-8℃,如果要長時(shí)間存放,可以放置在-20℃。

問題與解決方法:

問題

評論與建議

DNA產(chǎn)量低或者洗

脫液中無DNA

Acryl Carrier沒有加入到結(jié)合液CB-建議:仔細(xì)閱讀注意事項(xiàng)4。

*樣品凍融超過1次-建議:盡量使用新鮮樣品和凍融不超過1次的樣品。

*樣品在室溫放置過久-建議:盡快處理樣品或者低溫適當(dāng)方式保存。

*裂解不wan全,蛋白酶K失效了-建議:收到蛋白酶K后,按照每次使用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融。

*結(jié)合液CB和Acryl Carrier沒有充分混勻-建議:充分渦旋混勻。

*試劑和樣品沒有充分混勻-建議:加入每個(gè)試劑后都要充分混勻。

*洗脫效率不高-建議:確保做了步驟9,否則殘留乙醇會(huì)影響洗脫效率,仔細(xì)閱讀步驟13和只使用洗脫緩沖液EB洗脫。

DNA的下游反應(yīng)如

PCR效果不佳

* DNA產(chǎn)量低或者洗脫液中無DNA-建議:在下游反應(yīng)中增加DNA用量。

* 降低的靈敏度-建議:確定在下游PCR應(yīng)用中DNA洗脫液的最大允許用量,減少或者增加DNA洗脫液在PCR反應(yīng)中的用量,DNA洗脫體積也可以相應(yīng)的調(diào)整。

DNA下游酶切
不能切開或者
酶切不wan全

* 離心柱殘留有較多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反應(yīng)-建議:確保做了步驟9,然后空氣中晾幾分鐘,讓殘留乙醇揮發(fā)。

* 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗脫下來,抑制了酶切反應(yīng)-建議:將洗脫的基因組DNA溶液13,000rpm再離心一分鐘,小心取上清使用。

 

口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he

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