NobleRyder GUS染色液 即用型液體試劑
NobleRyder GUS染色液 即用型液體試劑NobleRyder 即用型液體試劑 D6611-100ml
GUS染色液
產(chǎn)品簡介：
GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細(xì)菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶，該基因常作為融合標(biāo)記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達(dá)E.coli GUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性，絕大多數(shù)植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物，其反應(yīng)產(chǎn)物可用多種方法檢測出來。5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(簡稱為X-Gluc或X-GlcA)分子量為521.8，CAS號(hào)為18656-96-7，是檢測大腸桿菌中GUS基因的底物，可快速檢測植物中GUS基因融合標(biāo)記。
β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)簡稱為GUS染色液，其染色原理是適宜的反應(yīng)條件下，β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì)，該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì)，具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)，可用肉眼或顯微鏡觀察到。GUS染色液可用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細(xì)胞的組織化學(xué)染色，多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)分析。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
NobleRyder GUS染色液 即用型液體試劑
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | D6611 110ml | Storage |
試劑(A): GUS Buffer A | 50ml | RT |
試劑(B): GUS Buffer B | 0.2ml | 4℃ 避光 |
試劑(C): GUS Buffer C | 0.2ml | 4℃ 避光 |
試劑(D): 2×Fixation Buffer | 25ml | RT 避光 |
試劑(E): X-GlcA | 80mg | -20℃ 避光 |
試劑(F): X-GlcA solvent | 1ml | RT 避光 |
試劑(G): Deionized water | 100ml | RT |
使用說明書 | 1份 | |
自備材料：
1.無水乙醇、甲醇
2.去離子水
3.小瓶或多孔板、顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
配制X- GlcA Solution：取X-GlcA solvent 229μl加入至80mg X-GlcA中或取適量上述2種物質(zhì)溶解，使其濃度達(dá)到350mg/ml，輕輕Vortex混勻，即為X- GlcA Solution，分裝后，-20℃避光保存。
按下列比例配制GUS染色液：
組分 | 體積 |
GUS Buffer A | 2.5ml |
GUS Buffer B | 10μl |
GUS Buffer C | 10μl |
Deionized water | 5.5ml |
甲醇 | 2.0ml |
X-GlcA Solution | 20μl |
Tatal volume | ～10ml |
固定(固定不是必須的步驟，如果不需要固定，直接進(jìn)行操作步驟4)：
1、取轉(zhuǎn)基因植物組織，入3～5ml清潔小瓶或多孔板中。
2、取適量2×Fixation Buffer與去離子水等量稀釋即獲得1×Fixation Buffer。加入1×Fixation Buffer，使Fixation Bufferwan全浸沒組織。室溫孵育45min，棄液。
3、配制洗滌液： 按GUS Buffer A:去離子水=1:20稀釋，即為洗滌液。用配制好的洗滌液漂洗3次，每次1min。
4、加入適量GUS染色液，使GUS染色液wan全浸沒組織。
5、用真空泵抽取小瓶或多孔板中的氣體，抽取時(shí)間應(yīng)大于2min。該步驟是為了抽取植物組織內(nèi)的氣體，并使染色液更容易進(jìn)入組織內(nèi)。
6、立即蓋緊瓶子或多孔板，37℃孵育24h。隨著孵育時(shí)間的延長，藍(lán)色漸漸出現(xiàn)，當(dāng)表達(dá)量較高時(shí)，GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)。
7、用乙醇脫去樣本的葉綠素，一般樣本浸沒于乙醇1～3h。如有必要可重復(fù)該脫色步驟，以便徹di清除葉綠素。樣本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光學(xué)顯微鏡下觀察。
注意事項(xiàng)：
1、配制好的GUS染色液可以4℃避光保存半個(gè)月。
2、X-GlcA Solution應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則染色效率會(huì)下降。
3、由于組織特異性等原因，藍(lán)色顏色反應(yīng)可能不wan全一致，應(yīng)注意摸索具體實(shí)驗(yàn)條件。
有效期： 6個(gè)月有效。
NobleRyder GUS染色液 即用型液體試劑
