概述

糖苷內(nèi)切酶 H 是一種重組糖苷酶，能夠?qū)?/span> N- 糖蛋白中的高甘露糖型和某些雜合型寡聚糖的殼二糖核心結(jié)構(gòu)進(jìn)行切割（ 1 ）。

反應(yīng)條件

在糖蛋白變性緩沖液（含 5% SDS ， 40 mM DTT ）中 100 ℃ 煮沸 10 分鐘使糖蛋白變性。在 1X G5 反應(yīng)緩沖液 [50 mM 檸檬酸鈉（pH 5.5 @ 25 ℃ ） ] 中于 37 ℃ 溫育，以進(jìn)行酶解反應(yīng)。

隨酶提供的試劑

10X 糖蛋白變性緩沖液 
10X G5 緩沖液

分子量

Endo H ： 29 kDa

*

無外切糖苷酶污染，無蛋白水解活性。

單位定義

1 單位指在 10 μl 的反應(yīng)體系中， 37 ℃ 條件下 1 小時(shí)從 10 μg 變性 RNase B 中除去超過 95% 的碳水化合物所需要的酶量（ 10 NEB units = 1 IUB milliunit ）。

濃度

Endo H ： 500,000 units/ml

貯存條件

20 mM Tris-HCl （ pH 7.5 @ 25 ℃ ）， 50 mMNaCl 和 5 mM Na₂EDTA ，貯存于 -20 ℃ 。

使用注意

酶的活性不受 SDS 抑制。

要使天然糖蛋白去糖基化，或許需要增加酶量和延長溫育時(shí)間。

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