Cisbio激酶、GPCR、代謝、免疫標(biāo)記試劑HTRF®技術(shù)

HTRF®是均相時(shí)間分辨熒光技術(shù)的簡(jiǎn)稱，HTRF®技術(shù)是對(duì)TR-FRET技術(shù)的進(jìn)一步改良，提供了更高的靈敏度和穩(wěn)定性，為法國(guó)Cisbio公司的zhuanli技術(shù)。

Cisbio Bioassays是一家超過50年歷史的生命科學(xué)、醫(yī)療診斷和藥物研發(fā)公司，最初在體外診斷方面的成就提供了豐富的免疫化驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)，這方面的經(jīng)驗(yàn)與Jean-Marie Lehn 教授（1987年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)得主）在稀土熒光特性方面研究合作，造就了如今的HTRF技術(shù)。如今，HTRF®在藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域成為了*受歡迎的方法之一。*各大制藥企業(yè)、藥物研究所和新藥篩選中心都將HTRF®作為重要的化合物篩選方法進(jìn)行藥物研發(fā)。

Cisbio Bioassays公司主要提供基于HTRF®技術(shù)的完備整套產(chǎn)品，涉及藥物篩選、疾病診斷、免疫學(xué)分析等多個(gè)方面，包括激酶、GPCR、代謝、免疫標(biāo)記試劑等。在*高通量篩選領(lǐng)域（HTS），Cisbio公司占據(jù)了TR-FRET市場(chǎng)的主導(dǎo)份額。

我們北京諾博萊德科技有限公司作為Cisbio Bioassays公司的經(jīng)銷商為客戶提供，正規(guī)進(jìn)口，貨期穩(wěn)定，折扣好的服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

Cisbio Bioassays公司部分產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

HTRF®技術(shù)： 免洗的Elisa，傳統(tǒng)Elisa的替代技術(shù)，跟傳統(tǒng)的Elisa有wuyulunbi的優(yōu)勢(shì)：

操作非常簡(jiǎn)單：空板直接加樣，加完即可檢測(cè)。

體系非常穩(wěn)定：7天之內(nèi)可隨時(shí)檢測(cè)，信號(hào)基本不變。

數(shù)據(jù)客觀真實(shí)：可有效去除背景熒光，假陽性率、假陰性率低。

HTRF®原理

HTRF®（均相時(shí)間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一種用來檢測(cè)純液相體系中待測(cè)物的技術(shù)。該技術(shù)結(jié)合了熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer） 和時(shí)間分辨熒光 （TRF, Time-Resolved Fluorescence)）兩大技術(shù)。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）

利用兩種熒光基團(tuán)，分別稱為能量供體（Donor）和能量受體（Acceptor）。在供體和受體相互靠近時(shí)，能量從供體轉(zhuǎn)移到受體上，并使后者發(fā)出熒光。

由于受體分子的發(fā)射光來自于能量轉(zhuǎn)移，所以在實(shí)驗(yàn)中無需包被、無需將未結(jié)合與已結(jié)合的分子分開，即無需洗滌步驟。

時(shí)間分辨熒光（TRF）

利用稀土元素中鑭系元素的*性質(zhì)，其熒光比普通熒光持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。普通熒光的半衰期為納秒級(jí)，鑭系元素的半衰期為毫秒級(jí)，有6個(gè)數(shù)量級(jí)的差別。所以在檢測(cè)時(shí)，TRF有一個(gè)時(shí)間延遲-50微秒，從而使普通背景熒光信號(hào)幾乎為零。因此TRF的背景非常低，反映樣品實(shí)際情況。

HTRF®的技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn)

HTRF®的能量供體是銪（Eu3+）和鋱（Tb2+）的穴狀化合物（如右圖）。在穴狀化合物里，Eu和Tb被yongjiu地嵌合在一個(gè)籠子中，結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定，對(duì)溫度、PH值、金屬離子、螯合物等耐受性*。

HTRF®的能量受體為XL665和d2。兩者激發(fā)波長(zhǎng)為620 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為665 nm。XL665是改良過的別藻藍(lán)蛋白（APC），其將APC的亞基偶聯(lián)，使其不能解離，增加了穩(wěn)定性。d2是第二代受體，光譜學(xué)特征與XL665相同，但分子量較小，約為1KD，可減少空間位阻對(duì)實(shí)驗(yàn)的可能影響。

HTRF®的操作步驟

HTRF®的操作步驟非常簡(jiǎn)單，只需要將實(shí)驗(yàn)所需試劑加進(jìn)去，然后孵育、檢測(cè)即可

HTRF®的數(shù)據(jù)分析

HTRF®采用了比值法來處理數(shù)據(jù)，可以去除由于溶液通透率、細(xì)胞大小、細(xì)胞數(shù)量不同引起的誤差。

HTRF®的應(yīng)用范圍

G蛋白偶聯(lián)受體研究：受體第二信使檢測(cè)  受體配體結(jié)合  胞內(nèi)信號(hào)分子檢測(cè)

激酶活性檢測(cè)：胞外激酶活性檢測(cè) 胞內(nèi)激酶活性檢測(cè)

生物標(biāo)志物檢測(cè)：基于抗體的夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)

抗體檢測(cè)：抗體重鏈含量測(cè)定、抗體輕鏈含量測(cè)定

生物過程分析：GST含量測(cè)定、HIS含量測(cè)定、CHO宿主蛋白含量測(cè)定

免疫過程分析：CD16結(jié)合檢測(cè)、CD32結(jié)合檢測(cè)、CD64結(jié)合檢測(cè)

相互作用分析：蛋白-蛋白、蛋白-多肽、蛋白-DNA、蛋白-RNA

蛋白修飾：蛋白甲基化、蛋白乙?；?、蛋白泛素化、蛋白水解

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